一：什么是固定

       将组织浸入某些化学试剂，使组织细胞内所含物质尽量保持在生活状态时的形态结构和位置的过程，称为固定。所使用的化学试剂称为固定液。固定是组织切片中不可缺少的重要步骤，对石蜡切片显得尤为重要。及时、充分的固定是制作良好切片的基础，如果组织固定不良，在切片制作的其他技术流程中则无法纠正，难以保证切片质量，故需要特别注意。

二：固定目的

      1.防止自溶和腐败   固定液能迅速阻断组织或细胞离体后的自溶性变化，防止腐败，使组织和细胞尽可能保持生活状态时的形态结构。

      2.凝固或沉淀细胞内物质   固定液能使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分沉淀或凝固，保持原有的结构和位置，有利于镜检时的确切定位。

      3.硬化组织   固定液有硬化、固化作用，可增加组织的硬度，使半液体状（胶体）物质变成半固体状（凝胶）物质，组织硬度增加便于制片。

      4.增加组织的折光率   固定能使组织中的各种物质对染料产生不同的亲和力，并产生不同的折光率，有利于染色和观察。

三：固定方法

      细胞的主要组成成分是蛋白质、脂质及糖类，应根据观察目的和诊断要求，选用相应的固定液和固定方法，使其凝固或沉淀。常规组织切片，使用一般固定液即可，若要观察特殊物质，则应采用特殊的固定方法。常用固定方法有以下几种。

      1. 浸泡固定法   将标本直接放入固定液中进行固定的方法，称为浸泡固定法。病理活检、尸检几乎均用此法。如组织或器官较大，可切取小块组织单独固定。较柔软的组织可在整体固定2-3个小时后再切块继续固定。固定液的量不能少于组织块总体积的4倍。

      2. 注射、灌注固定法    将固定液注射或灌注到血管或腔道内，使组织、器官被充分固定的方法称为注射、灌注固定法。注射固定法常用于体积过大组织的固定，而灌注固定法则用于整个脏器或尸体的固定。

      3. 微波固定法   将组织块浸入固定液，置于医用微波仪内，在微波的作用下加速组织固定的方法，称为微波固定法。此法用时短，一般辐射3~5分钟即可。经过微波固定的组织，染色后核膜清晰、染色质均匀，并且组织结构收缩小，可见胞质中的红染颗粒。微波固定的组织可用生理盐水或10%甲醛溶液。微波固定时应严格控制温度，否则会影响组织固定的质量。

     4.蒸汽固定法   用固定液加热后产生的蒸汽对组织进行固定的方法，称为蒸汽固定法。主要用于可溶性物质、小而薄的标本、膜性组织及血液或细胞涂片的固定。常用的固定液有甲醛、三聚甲醛和锇酸等。

四：固定的注意事项

     1.及时固定    标本应新鲜，取材要及时，取材后立即将组织块放入固定液中，若固定太迟（如夏天超过4小时，冬天超过24 小时），组织会干涸、自溶、腐败。神经、造血组织、胰腺、胃肠道黏膜等容易发生自溶，更应特别注意。

     2. 固定容器宜大   为方便固定组织的取放，用于固定的容器不应过小，瓶口宜大。为避免组织紧贴容器壁或容器底部，可在容器底部铺垫棉花，并定时轻轻搅动固定液或摇动容器，以利固定液向组织内均匀渗透。

     3. 固定液应足量    固定液的量不足，起不到固定作用；固定液过多，导致浪费。固定液的量一般为被固定组织体积的10~20倍，贵重的固定液不少于3~5倍。

     4.防止组织变形   固定神经、肌腱、肠系膜等柔软或较薄的组织时，应先将组织平铺于吸水纸上，再放人固定液中。对于胃、肠等有腔器官，应按常规剪开，钉于木板上，面向下放人固定液中。肺组织因含气体而浮于液面，可系重物使其下沉，或在其表面覆盖厚纱布（或棉花），使其充分固定。

     5. 确定恰当的固定时间    固定时间应依据组织块的大小、厚薄，以及固定液的种类、环境温度而定。组织块大小为（1.0~1.5）cm 1cm×（0.2~0.3）cm 时，固定时间以12~24小时为宜。