[选材与涂片]1.选材痰液是从各个支气管所汇集的分泌物，痰液性状与痰检阳性率关系密切，因此，观察和挑选有诊断意义的痰液很重要。从病变处来的痰液有其特殊的性状，应仔细挑选有诊断意义的痰液。方法:在充足的日光或光线下认真观察痰液的性状。如痰内混有大量食物残渣、唾液，属于不满意标本，应弃之，再取材。肺部来源的痰，一般比较黏稠或有黏液丝，多数病例痰中癌细胞的数量不多，且常局限在痰的某一部分，因此应认真选取痰中适当的成分。首先要将痰液平铺在玻璃平皿中，用竹签或眼科镊子把痰液牵开，用放大镜在黑色背景下仔细观察，选取那些带血丝的痰液、鲜血旁的黏液、灰白色痰丝以及那些粗如细丝、呈螺旋卷曲状、牵引时可伸长放松又缩短的痰丝，这种类型的痰液往往含癌细胞较多。蛋清状透明的黏液有时也可见

支气管、肺脱落细胞学检验是肺癌早期诊断的重要方法。肺癌是发生于支气管上皮和肺泡上皮的恶性肿瘤，其发病隐匿，早期常无明显临床表现，易被忽视，确诊病例多为晚期肺癌。肺癌早期的临床诊断主要采用X线照片、CT扫描、支气管镜和细胞学检查等。其中以细胞学检查方法最为简单、且无痛苦能及早查出早期肺癌。细胞学检查包括痰脱落细胞学检验法(简称痰检)、支气管镜刷取或冲洗法、经胸腔细针穿刺法等。其中痰液检验法阳性检出率甚高，是确诊肺癌的主要方法之一。除肿癌外，支气管、肺脱落细胞学检查对于肺内其他恶性肿瘤或其他良性病变的诊断也可提供重要的参考依据。[标本采集]1.自然咳痰法嘱患者早晨咳痰之前漱口、刷牙，以避免食物残渣和细菌的污染。要指导患者用力咳痰，反复几次同样动作，将咳出的痰液吐入标本盒

固定（fixation）的主要目的在于保持细胞的自然形态，防止细胞自溶或细菌性腐败，保持细胞内蛋白质、糖等成分易于着色。（一）常用固定液1.95%乙醇固定液为最常用的固定液，适合大规模防癌普查时使用，但渗透性较差。如加入1%量的冰醋酸，可增强固定效果，并有对抗乙醇固定的收缩作用。2.乙醚乙醇固定液此固定液渗透性强，固定效果好，适于一般细胞学染色，如巴氏染色和HE染色。3.三氯甲烷乙醇固定液又称卡诺（Carnoy）固定液，穿透力强，固定效果好。（二）固定方法1.带湿固定法即涂片尚未干燥时即进行固定的方法，适用于痰、宫颈刮片及食管拉网涂片的固定，不适用于太稀薄的标本。可将涂片直接浸入容器的固定液中浸泡（浸入法）10-30分钟，但是细胞容易脱落，引发交叉污染，因此固定时应该分瓶固定，固定液回收时要

细胞学检验标本的制作一般采用涂片的方法，即将采集来的样品直接涂抹到载玻片上。良好的涂片质量是保证正确诊断的重要条件之一。（一）涂片操作注意事项（1）操作要轻巧，避免人为损伤脱落细胞。（2）厚薄要适宜。涂片太厚，细胞容易重叠，不利于镜检；涂片太薄，片中细胞数量太少，容易漏诊。（3）涂片应均匀。细胞成分应涂布在玻片的2/3范围内，以利于观察和摄影，余1/3留作贴标签。（4）同一标本至少一次涂2张涂片，要做好标记，刻写编码，防止错号与漏诊的发生。（二）涂片操作方法1.推片法通常把标本低度离心或自然沉淀后推片。方法是两手各持一张玻片，甲玻片前部涂有样品，然后将样品处与另一手上玻片之间形成40°左右夹角，将载玻片上的细胞标本匀速推动，做成细胞涂片。注意；因癌细胞体积较大，常位于细

标本采集是脱落细胞学检验成功与否的重要环节。取材的好坏，直接关系到检查的准确性。（一）标本采集的原则（1）采集目标细胞要尽可能直接从病变区域采集细胞，这对采集来自表面结构的细胞是比较容易做到，但对于发生在内脏的肿块，用细针吸取细胞进行活检，就存在着一定的难度，为此有必要与仪器定位结合，在B超、CT或X线透视引导下，直接达到病灶吸取病变细胞。（2）采集的标本要新鲜，要防止细胞白溶或腐败。（3）采集标本时要避免污染，减少干扰物（如血液、黏液等）混入。（4）采集的方法应简便、轻柔，要减少受检者痛苦，避免引起并发症，防止病变（特别是肿瘤）进一步播散。（二）标本采集的方法1.直视采集法即在肉眼直视下，利用刮片轻刮、吸管吸取等方法直接采集标本，如外阴、阴道、宫颈、阴道穹隆、鼻腔、

细胞病理学又称诊断细胞学，或临床细胞学，是通过观察细胞的结构和形态来研究和诊断疾病的一门科学，是病理学的分支学科之一，与活体组织检验关系十分密切。临床上根据细胞标本来源不同，细胞病理学检验目前可分为脱落细胞学检验和细针穿刺吸取细胞学检验两类。前者以生理或病理情况下脱落的细胞作为研究对象，如胸腹水、胃液、尿液、痰液等。后者是用特制针具穿刺病变部位取得细胞作为研究对象，如从淋巴结、甲状腺、乳腺肿块等取得细胞成分。用各种方法采集的细胞标本，常规都要经过涂片、固定、染色，用光学显微镜观察细胞形态，然后做出诊断等技术流程。细胞学的检查方法简便易掌握，结果又较可靠。目前已成为临床恶性肿瘤早期诊断的重要方法之一，被广泛应用于临床检查和肿瘤普查。—应用范围1.诊断某些良性病变

一、固定不当甲醛固定液失效、固定时间不充分或未及时固定，都可以导致细胞着色差、轮廓模糊等，因此应及时更换固定液，对组织标本做到及时、及早和充分固定，以保证组织切片质量。二、脱蜡不净（1）组织切片脱蜡不彻底时，可出现组织切片局部不着色或着色淡等，应延长脱蜡时间；室温较低时应增加脱蜡时间，或将组织切片放入二甲苯后，置入温箱中加温脱蜡。（2）组织片比较厚或二甲苯使用时间过长，可出现整张切片不着色或着色较差的情况，应延长脱蜡时间或更换二甲苯。三、染色与分化不当（1）染液量不足，没有完全浸没组织切片，切片局部可出现不着色的现象，应立即添加染液，确保染液完全浸染组织。（2）整张切片着色淡。1）盐酸乙醇停留时间过长所致。应该水洗后重新染苏木素，再水洗分化。2）染液使用时间较长或

苏术素-伊红染色简称（HE染色）。HE染色能较好显示组织结构和细胞形态，主要用于观察和描述正常和病变组织的形态特征，是医学领域中广泛应用的染色方法，也是病理检验中最常用的基本染色方法。习惯上称苏木素-伊红染色为常规染色。苏木素（haematoxylin）又称苏木精，是从苏木素树心中提炼出来的一种天然碱性染料，为淡黄色粉末，易溶于乙醇，也可溶于热水。是最常使用的细胞核染料。伊红Y（eosin）又称曙红Y，简称伊红，是酸性染料，化学名称为四溴荧光素二钠盐。伊红分水溶性和醇溶性两种，常规染色中多用水溶性伊红。首先是苏木素染色的基本原理，我们习惯上称苏术素为碱性染料，实际上，苏木素本身并没有着色的能力。苏木素染色时，必须首先经过氧化，成为酸性苏木红，又称氧化苏木素。苏木红分子才含有发色团（

冷冻切片又称冰冻切片，是将组织冷冻后直接进行切片，不经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等过程，极大地缩短了制片的时间，是一种简便快速的制片方法，对临床手术患者的术中快速病理诊断具有重要意义。由于冷冻切片制作时不用乙醇和二甲苯，对脂肪、类脂质和酶的保存较好，因此，冷冻切片也常用于脂肪染色、神经髓鞘的染色，以及组织化学和免疫组织化学染色。新鲜组织、已固定的组织和低温冰箱冷藏的组织块等均可用于冷冻切片，但已固定的组织块需经流水冲洗后方可进行冷冻切片。1.制作过程冷冻切片的制作一般经过取材一固定（或不固定）—组织速冻一冷冻切片一贴片（或不贴片）一染色等过程。以下介绍主要制片过程。（1）取材：送检的组织应尽可能新鲜，不应有过多的水分，以避免冰晶形成时造成组织变形。选取最有

一种好的固定液，应具有以下特性：①渗透力强，能迅速渗人组织内部；②不会使组织过度收缩或膨胀；③能硬化、固化组织，使细胞成分的形态和位置与生活状态时相似；④使组织对染料产生较强的亲和力，并产生较佳的折光率。固定液可分单纯固定液和混合固定液两类。1.单纯固定液是指由一种化学物质组成的固定液。此类固定液包括：甲醛、乙醇、乙酸、重铬酸钾、苦味酸、丙酮、氯化汞、铬酸、锇酸等，常用的如下。（1）甲醛（福尔马林）：为一种可溶于水的无色气体，极易挥发，有强烈的刺激性气味，市售为37%~40%甲醛水溶液，用于固定的甲醛溶液浓度为4%，是40%甲醛溶液和水按1：9比例配制而成。甲醛是一种还原剂，易被氧化成甲酸，故不能和锇酸、重铬酸钾及铬酸等氧化剂混合。甲醛渗透力强，组织收缩小，能较好硬化组织。