特殊染色之病原微生物染色
病原微生物包括细菌、真菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、病毒等,组织及细胞中这些病原体的检测对于感染性疾病的病理诊断有非常重要的作用。
一、细菌染色
细菌是临床上最常见的致病微生物,一般用油镜才能观察到,根据细菌的外形可以将细菌分为球菌、杆菌和螺旋菌三类。根据特殊染色方法把细菌分为一般细菌和抗酸杆菌两类。 革兰色法将一般细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
1.Warthin-Starry幽门螺杆菌染色
幽门螺杆菌是存在于胃幽门呈“S”弧形弯曲的一种革兰阴性菌,现已证明,它与慢性胃炎和消化性溃疡、胃癌及低度恶性胃淋巴瘤的发病有关。其染色的方法有多种,经典的方法为Warthin-Starry染色。
[染色原理]
幽门螺杆菌含有蛋白和多糖物质,在一定温度下幽门螺杆菌能吸附硝酸银液中的银离子,再经还原反应,被吸附的银离子被还原为金属银。
[染色结果]
胃幽门螺杆菌呈棕黑至黑色,背景呈黄色。
[注意事项]
显影液应在切片置56℃水浴箱作用1小时完成之前5分钟,置于56℃水浴中保温待用。
2.Ziehl-Neelsen[抗酸杆菌染色]
抗酸杆菌菌体内含有脂质、蛋白和多糖类并被覆一种特殊的脂质性包膜,对酸碱性染料有着一定的拒染作用,因此不易着色。常选用Ziehl-Neelsen,用以显示结核病的干酪样坏死灶及麻风病中泡沫状细胞内的抗酸杆菌。其形态特点是:结核分枝杆菌弯曲细长,长短粗细不一;麻风杆菌短粗成堆,数量较多。
[染色结果]
抗酸杆菌呈红色,背景呈灰蓝色。
[注意事项]
(1)苯酚复红液需加热至37℃~40℃,进行染色。
(2)盐酸乙醇分化应严格掌握,一般经水洗后,0.5%盐酸乙醇分化至切片的组织稍带淡红色为止。
(3)亚甲蓝(美蓝)复染以后用95%乙醇快速分化,防止过度脱色(保持对比的色彩度)。
二、真菌染色
真菌种类繁多,致病性真菌常见的有毛霉菌、新型隐球菌、曲霉菌、放线菌、白色念珠菌等,近年来由于抗生素、激素、化疗和免疫抑制剂的广泛应用,导致真菌病发病率增高,更需要真菌染色来协助病理诊断
1. 过碘酸-Schiff(PAS)反应
[染色结果]
真菌呈红色,细胞核呈蓝色
2. Grocott六胺银染色
[染色原理]
真菌内的多糖化合物被铬酸氧化生成醛类化合物,暴露的醛基将六胺银中的银还原成墨色的金属银。
[染色结果]
真菌呈黑色,背景呈淡绿色。
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