我科开展人乳头瘤病毒核酸检测项目已经一年多了，由于初次开展此项目，技术与诊断方面不太成熟，未能及时做相关方面的介绍，现在经过一年多的沉淀，科室内技术人员检测了近五千人的样本，技术与诊断方面已相当成熟，总结各项经验，在此做一个较为细致的介绍。

人乳头瘤病毒，简称HPV，是一种DNA病毒，由病毒蛋白衣壳和核心单拷贝的病毒基因组DNA构成。可引起人类皮肤及粘膜的增生性病变，主要通过性生活或密切接触传播。HPV目前约有200种型别，根据致癌潜力，可分为高危型与低危型。高危型HPV持续感染可引发宫颈、外阴、阴茎等部位的癌前病变，低危型HPV持续感染可引起皮肤疣、生殖器疣、乳头状瘤等疾病。临床上，通过HPV核酸检测结合宫颈细胞检测可筛查高风险的宫颈细胞病变及宫颈癌。

目前我科制定标准化的人乳头瘤病毒核酸检测操作流程，规范从样本采集、运输、接收保存、检测到发布报告的全过程、确保检测结果的准确、可靠。现可检测24种基因型（6，11，16，18，31，33，35，39，42，43，44，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，81，82，83）人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）的核酸。

一、检测目的：

1．用于体外定性检测女性宫颈脱落上皮细胞样本中24种基因型，可鉴别病毒基因亚型。

2．采用PCR体外扩增和DNA反向斑点杂交法相结合的DNA芯片技术，主要用于对人乳头瘤病毒（HPV）的感染情况进行定性检测并对核酸进行基因分型，用于临床HPV感染的辅助诊断。

3．可检测24种HPV基因型，并直接提示感染HPV的基因型，包括：

1) 18种高危型：HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82，83；

2) 6种低危型：HPV6，11，42，43，44，81

二、检测原理：

采用PCR体外扩增和DNA反向斑点杂交法相结合的DNA芯片技术，检测24种人乳头瘤病毒核酸亚型。当待测样本加入到HPV检测芯片加样孔后，在微泵的驱动下，分别进行目的DNA的提取、针对目的DNA进行的PCR扩增和反向斑点杂交。根据HPV特定基因设计的特异性引物，可以扩增出24种HPV基因型的目的片段，仪器将扩增产物转移到芯片的检测区，在检测区杂交膜上包被有HPV24种亚型的检测探针，如果扩增产物中含有目的基因则能够被芯片上的探针捕获，再加入酶液和显色液后在杂交膜的特定位置出现蓝色的斑点，可判断出感染人乳头瘤病毒核酸及感染的亚型，如果不含目的基因，则在特定的位置不会出现蓝色斑点。（基因芯片法：指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者大量DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样本杂交，每一个探针对应一个点，通过对杂交信号的检测分析，得出样本的遗传信息。）

三、样本类型：

1．样本类型：直接采集的人体子宫颈口脱落细胞。

2．样本采集：以专用宫颈脱落细胞采集器进行采样。医护人员先以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去，取出宫颈刷置于宫颈口，单方向旋转4~5周以获得足量的上皮细胞样本，然后将宫颈刷头部放入洗脱管中，沿刷柄折痕处将宫颈柄刷折断，旋紧洗脱管盖，做好样本标识，并保持洗脱管直立放置。

四、样本保送与存放：

(1)、样本保存:样本一经采集，应尽快送检；样本室温保存不超过2小时，2~8℃保存不超过 1天，-20℃保存不超过3个月，避免反复冻融。

(2)、样本运输:冰壶或泡沫箱加冰袋密封运输，在途时限不超过48小时。

五、结果判定：

采用微量点样技术，将各位点检测探针与各种质控探针固定在杂交膜上，其中24种亚型HPV检测探针、空白对照、阴性对照各1个点，内参质控探针有3个不同浓度，每个浓度各1个点，显色质控探针重复3个点。探针排布图如图所示，排布说明见下表。

1)、阳性结果判定：杂交膜的SP点（3个）均有阳性斑点，内参质控点（3个）的GB-50点有阳性斑点，且有HPV探针阳性斑点出现，提示样本为该探针对应亚型阳性；

2)、阴性结果判定：杂交膜的SP点（3个）均有阳性斑点，内参质控点（3个）的GB-50点有阳性斑点，且无HPV探针阳性斑点出现，提示该样本HPV为阴性。

3)、其他可能结果说明：若内参质控点（3个）的GB-50点有阳性斑点，无论GB-20和GB-2点有或没有阳性斑点，均提示内参扩增成功，不影响结果判定；若杂交膜的空白对照点或阴性对照点阳性，提示实验过程可能发生污染，实验不成功，建议重复试验；若杂交膜的SP点（3个）无阳性斑点，提示显色失败，实验不成功，建议重复试验；若杂交膜的SP点（3个）有阳性斑点，但内参质控点的GB-50点无阳性斑点，提示样本内参杂交失败，需对该样本做重复试验，若重复试验GB-50点仍无阳性，则判定样本采集不符合要求。

六：注意:

1. 检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状、体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
2. 可以检测HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、81、82、83共24种HPV亚型，对于其他基因型感染不能检出。
3. 不合理的样本采集、转运及处理、样本中病毒滴度过低均有可能导致假阴性结果。
4. 未经验证的其他干扰可能会导致错误的结果。
5. 临床解释：

本检测结果为阳性时，仅提示感染HPV，可进一步进行宫颈细胞学检查和阴道镜检查。本检测结果为阴性时，宫颈癌的患病率较低。

最后，非常感谢各科室老师给予的支持，此项目的开展加强了科室之间的交流，促进我科室积极探索，不断提升医疗质量和技术水平，更好的为患者提供优质、安全、高效的医疗服务，推进医院高质量发展。

病理科 高小茜

2022年7月31日